http://w.atwiki.jp/gradealter/ とある医大生の個人的メモ？@ ウィキ ja 2009-02-24T00:15:00+09:00 1235402100 https://w.atwiki.jp/gradealter/pages/16.html ・[[サンガー･ジデオキシ法>http://www15.atwiki.jp/gradealter/pages/17.html]] ・[[転座]] ・[[モザイク]] 2009-02-24T00:15:00+09:00 1235402100 https://w.atwiki.jp/gradealter/pages/19.html **転座 translocation 転座とは､染色体間でその構成要素を交換することによっておこる。 染色体の一部がちぎれて､または全部が､他の染色体に結合した状態。 http://square.umin.ac.jp/~micky/chromo_trans.htm 参照 セントロメア融合によるもののほか ロバートソン型転座 相互転座 挿入転座がある。 2009-02-24T00:14:10+09:00 1235402050 https://w.atwiki.jp/gradealter/pages/18.html **モザイク モザイクとは､1回の受精によって生じた子どもの中に､遺伝的に異なっている複数の細胞が含まれている状態 2009-02-24T00:04:03+09:00 1235401443 https://w.atwiki.jp/gradealter/pages/17.html http://209.85.175.132/search?q=cache:NECCY9mE7oMJ:133.100.212.50/~bc1/Biochem/technic.htm+2,3-ddNTP&hl=ja&ct=clnk&cd=9&gl=jp からコピー ジデオキシ法（Sanger*法, 鎖終結法） 　　* インシュリンの1次構造決定でノーベル賞を受賞した人 　　　大腸菌DNAポリメラーゼIのKlenowフラグメントを用い、配列を決めたい1本鎖DNAの相補　　　的コピーをつくる。この時、DNA合成に必要な4種のdNTP(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)以外　　　に、DNA阻害剤である2',3'-ジデオキシヌクレオシド三リン酸(ddNTP)を少量反応液に加　　　える。ddNTP（terminatorという）が取り込まれると、DNA合成は停止する。反応の停止　　　はランダムな位置で起こるので、鎖の長さの異なる様々な断片が得られ、あとは化学的　　　分解法と同様な考え方で配列を決定する。 1) まず、配列を決めたい1本鎖DNAの3'末端に相補的な短いオリゴヌクレオチドをプライマーとして準備し、プライマーの5'末端を33Pや35Sで放射標識するか，または蛍光色素で標識する｡5' CTGACTTCGACAA 3' 未知の塩基配列をもつ1本鎖DNA 3' GTT● 5' 5'標識プライマー 2) 配列を決めたい1本鎖DNA溶液を4等分し、標識プライマー、4種のdNTPを加える。これらにterminator（ddNTP）を1種ずつ加える。 3) DNAポリメラーゼIのKlenowフラグメントを加えて複製を開始する。 ->加えたddNTPのため、鎖伸長はランダムな位置で停止する。 DNAポリメラーゼI dATP dGTP dCTP dTTP 例えばddATPを少量加えた試験管の場合、上の配列では次の 3つの標識断片が生成する。下線はプライマー部分を表す。 ddAGCTGTT-● 5' ddAAGCTGTT-● 5' ddACTGAAGCTGTT-● 5' 4) これら4つの試料をポリアクリルアミドゲル電気泳動にかける。各々のＤＮＡ断片はサイズだけで分離される。 5) ゲルのオートラジオグラムを作成する。 [Sanger法による塩基配列決定] 6) 図のように、泳動先端（下端）のバンドから順に上にバンドの位置を辿っていくことで、目的配列の相補鎖の5'→3'方向の配列を決定できる。 これを目的配列（鋳型鎖）に読み替えるには、読みとった配列をひっくり返せばよい。 蛍光標識法を用いる塩基配列決定の自動化 Sangerの原法では、実験ごとにプライマーをいちいち放射標識する必要があり、大変面倒である。波長の異なる蛍光発色団でterminatorを標識することにより、迅速で簡便な塩基配列決定法が開発された。ddATP-● ddTTP-● ddGTP-● ddCTP-● 　波長の異なる４種の蛍光発色団 実際には、rhodamine系蛍光色素 [蛍光標識terminators] ≪蛍光標識法の手順≫ 先ず、配列を決めたい1本鎖DNA、プライマー、4種のdNTPを含む溶液に、波長の異なる蛍光色素で標識した4種のddNTP混合物（terminator）を加える。 DNAポリメラーゼで鎖を伸長させる。加えたterminatorによって、鎖伸長はランダムな位置で停止する。 試料をゲル電気泳動にかける。 ゲルにレーザー光を当てて蛍光バンドを検出し、情報をイメージングシステムに転送する（図 8.11）。 検出したバンドの情報をコンピューターで処理し、ピークとして表す。 [蛍光標識法による塩基配列決定]《蛍光標識法の利点》 1. プライマーを標識する必要がない。 2. 反応は1本の試験管で行える。 3. 電気泳動も１試料１レーンですむため、バンドの物理的なゆがみによる読み取り誤差がない。 　また、大量の試料を一度に処理できる。 4. 放射能を使用しないので、いつでも実施でき、また、放射性廃棄物を出さない。 5. オートラジオグラフィーが不要。 6. 自動化ができるので、迅速で簡便。 2009-02-21T23:19:56+09:00 1235225996 https://w.atwiki.jp/gradealter/pages/15.html **・解剖学 **・基礎医学 　・[[遺伝学>http://www15.atwiki.jp/gradealter/pages/16.html]] **・臨床 2009-02-21T23:16:38+09:00 1235225798 https://w.atwiki.jp/gradealter/pages/3.html **メニュー -[[トップページ]] -[[分野別ページ>http://www15.atwiki.jp/gradealter/pages/15.html]] ---- **更新履歴 #recent(20) 2009-02-21T23:14:08+09:00 1235225648 https://w.atwiki.jp/gradealter/pages/2.html **ブックマーク ・[[電子医学ノート全文検索システム>http://akimichi.homeunix.net/cgi-bin/namazu.cgi]] 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