コンピテントセルのピックアップ - transfection

所要　2時間　

実作業　30分

手順

1. チューブに番号を振る（24本作成）
2. LB/ampプレートを新たに用意し、チューブの本数分領域分割し、番号を振る
3. チューブにアンピシリン添加TB培地を700μずつ分注
4. 滅菌した爪楊枝で、プレートから1コロニーをピックアップ（ひっかく）。
5. 1つのチューブ内で爪楊枝を数回まわして、細胞を少し落とす（液体培養にする）
6. 新しいプレート内にも、チューブに対応する領域（番号）に細胞を植える
7. 24本のチューブ全てに対して、3.-5.の作業を行う
8. 37℃でovernightインキュベート（チューブは振盪させる。プレートは静置）

コメント

• チューブが24本なのは、plasmid isolation system（KURABO社PI-24）にセットできる上限のため。
• プレートからコロニーをピックアップする場合、同時に2つのコロニーをひっかけないように注意。
  （離れたコロニーを選んでピックアップするのが無難）
• プレートからまんべんなくコロニーをピックアップした方がよいという意見がある。