胚移植

胚移植

　ルーチンワークで行う生殖工学技術の中で最も習得が難しいのが、胚移植である。難しくしている原因としては、（１）ドナー胚の状態に左右される、（２）遺伝子操作したターゲット遺伝子の影響を受ける、（３）胚を移植する仮親（recipient）の卵管・子宮の状態にも左右される、など複数の要因が関わるためである。

胚移植を実施する前に

　数年前まで、著者はヘビースモーカーであったが、タバコをやめた途端に産子率（新生児数/移植胚数×100）が向上した。また、マウスの胚移植の場合、マウスピースとガラスキャピラリーを使って移植するため、食事の前後に関わらず、胚移植の前には歯を再度磨くようにしている。理由はよくわからないが、実感として”胚に良い”と感じている。
　また、手技的に最も気をつけるところは、ガラスキャピラリーの太さと先端の形状（するどく尖っていると胚や卵管にダメージを与える）である。太さは、30Gの注射針よりも細くすることを目指せば良い。

仮親の準備

• 暗期に入る30分～1時間前程度に、発情前期の雌マウスを精管結さつ雄と同居させる（mate）
• 翌日朝に、膣栓（plug）を確した雌マウスを仮親とする（交配後0.5日，0.5 dpc）
• 子宮移植する際は、2.5 dpcの仮親を用いる

胚移植（卵管移植の場合）

• 適切な麻酔薬を用い、仮親を麻酔する
• 背中の皮膚を１カ所切開し、その後、左側の卵巣周囲脂肪組織の付近で腹膜を切開する
• 脂肪組織をピンセットでつまみ、卵巣～子宮角を体外に露出させる
• ブルクリップで脂肪組織を固定し、オペ中に卵巣～子宮角がブレないようにする
• 出血があると卵管切開部分を見失いやすいので、滅菌したキムタオルなどを卵管の下に敷いておく
• 卵巣を確認し、排卵を確認する。卵管膨大部を確認する
• 卵巣～卵管膨大部までの卵管に１カ所切り込みを入れる※
• ガラスキャピラリー内にマーカー用の空気を２～３入れ、そのあとに培地と一緒に胚を入れる※※
• 切開部分にキャピラリーを静かに入れ、卵管の中で何度かやさしく動かし、手に感覚を馴染ませる
• キャピラリーの先端が卵管壁に接触しすぎないように注意し、ゆっくりと息を吹く
• 卵管膨大部にマーカーの泡が入ったら、キャピラリーを卵管から離す
• 卵巣～子宮角を元の位置に戻し、腹膜を縫う
• 表皮を手術用クリップで縫合する
• 右側の卵管にも同様に移植する

※ノエス（マイクロせん刀）で切ってもいいし、30Gの針で穴を開けてもいい。卵巣～卵管膨大部までの卵管が短い時は（交尾直後）、卵巣嚢を注意深く切開して卵管を引き出すか、卵巣付近の卵管を30Gの針で穿刺するとよい。
※※特にミネラルオイルを取り除く必要はないが、培地のpHがアルカリに偏っていないことは培地の色などで確認しておく（大気中に放置しているとどんどんアルカリになっていくので注意）

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