コロニーPCR - (2011/04/20 (水) 18:54:25) の1つ前との変更点
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<コロニーPCR>
2×Go taq master mix 全量×1/2 ul
プライマー1 ul
プライマー2 ul
ミリQ ul
total コロニー数(+α)×20 ulになるように調製する
↓
8連チューブに20 ulずつ分注する
↓
LBAプレートを一枚用意する
↓
前日のプレートから白コロニーを爪楊枝でつつき、Go taq溶液に植える
同時にLBAプレートにも植える(レプリカプレートの作製)
↓
プレートは37℃でo/n培養
8連チューブはPCRにかける
条件
94℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30サイクル
72℃ min
72℃ 3 min
15℃ ∞
<コロニーPCR>
2×Go taq master mix 全量×1/2 ul
プライマー1 ul
プライマー2 ul
ミリQ ul
total コロニー数(+α)×20 ulになるように調製する
↓
8連チューブに20 ulずつ分注する
↓
LBAプレートを一枚用意する
↓
前日のプレートから白コロニーを爪楊枝でつつき、Go taq溶液に植える
同時にLBAプレートにも植える(レプリカプレートの作製)
↓
プレートは37℃でo/n培養
8連チューブはPCRにかける
条件
94℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30サイクル
72℃ min
72℃ 3 min
15℃ ∞
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