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オープンアクセス記事
Pfizer BioNTech COVID-19 mRNA ワクチン BNT162b2 の in vitro ヒト肝細胞株における細胞内逆転写
にマルクス・アルデン1ORCID、フランシスコ・オロフソン・ファリャ1、ヤン・ダオウェイ1、モハマド・バルグート1、チェン・ルアン1、マグナス・ラスムッセン2とヤン・デ・マリニス1,*ORCID
1
臨床科学科、ルンド大学、20502 マルメ、スウェーデン
2
感染症医学、臨床科学科、ルンド大学、22362 ルンド、スウェーデン
*
通信の宛先となる著者。
現在。モルを発行します。生物。 2022、44 (3)、1115-1126。
https://doi.org/10.3390/cimb44030073
受領日: 2022 年 1 月 18 日/改訂: 2022 年 2 月 19 日/承認済み: 2022 年 2 月 23 日/公開日: 2022 年 2 月 25 日
(この記事はトピック 肝疾患に関する臨床、トランスレーショナルおよび基礎研究に属します)
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オープンアクセス記事
Pfizer BioNTech COVID-19 mRNA ワクチン BNT162b2 の in vitro ヒト肝細胞株における細胞内逆転写
にマルクス・アルデン1ORCID、フランシスコ・オロフソン・ファリャ1、ヤン・ダオウェイ1、モハマド・バルグート1、チェン・ルアン1、マグナス・ラスムッセン2とヤン・デ・マリニス1,*ORCID
1
臨床科学科、ルンド大学、20502 マルメ、スウェーデン
2
感染症医学、臨床科学科、ルンド大学、22362 ルンド、スウェーデン
*
通信の宛先となる著者。
現在。モルを発行します。生物。 2022、44 (3)、1115-1126。
https://doi.org/10.3390/cimb44030073
受領日: 2022 年 1 月 18 日/改訂: 2022 年 2 月 19 日/承認済み: 2022 年 2 月 23 日/公開日: 2022 年 2 月 25 日
(この記事はトピック 肝疾患に関する臨床、トランスレーショナルおよび基礎研究に属します)
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概要
: ファイザーと BioNTech によって開発された COVID-19 mRNA ワクチン BNT162b2 の前臨床研究では、BNT162b2 注射を受けた動物で可逆的な肝臓への影響が示されました。さらに、最近の研究では、SARS-CoV-2 RNA が逆転写され、ヒト細胞のゲノムに組み込まれる可能性があることが示されました。この研究では、in vitro でヒト肝細胞株 Huh7 に対する BNT162b2 の効果を調査しました。Huh7 細胞を BNT162b2 に曝露し、細胞から抽出した RNA に対して定量的 PCR を実施しました。Huh7細胞で高レベルのBNT162b2が検出され、内因性逆転写酵素である長い散在核要素-1（LINE-1）の遺伝子発現の変化が検出されました。BNT162b2 で処理した Huh7 細胞上の LINE-1 オープン リーディング フレーム 1 RNA 結合タンパク質 (ORFp1) に結合する抗体を使用した免疫組織化学は、LINE-1 の核分布の増加を示しました。BNT162b2 に曝露された Huh7 細胞のゲノム DNA に対する PCR により、BNT162b2 に固有の DNA 配列が増幅されました。私たちの結果は、BNT162b2がヒト肝細胞株Huh7に急速に取り込まれ、LINE-1の発現と分布が変化することを示しています。また、BNT162b2 mRNA は、BNT162b2 曝露時に 6 時間という速さで細胞内 DNA に逆転写されることも示しています。
キーワード: COVID-19 mRNAワクチン; BNT162b2 ; 肝臓; 逆転写; LINE-1 ; Huh7
1.はじめに
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス 2 (SARS-CoV-2) によって引き起こされるコロナウイルス病 2019 (COVID-19) は、2020 年 3 月 11 日に世界保健機関 (WHO) によって世界的なパンデミックとして発表され、壊滅的な健康危機として浮上しました。 . 2022 年 2 月の時点で、COVID-19 により、世界中で 4 億 3000 万件を超える感染症例が報告され、590 万人が死亡しています [ 1 ]。COVID-19 に関連する罹患率と死亡率を下げるには、効果的で安全なワクチンが緊急に必要です。
COVID-19 のいくつかのワクチンが開発されており、特に mRNA ワクチン (Pfizer-BioNTech および Moderna による)、複製欠損組換えアデノウイルスベクターワクチン (Janssen-Johnson および Johnson、Astra-Zeneca、Sputnik-V、および CanSino による) に焦点を当てています。 )、および不活化ワクチン (Sinopharm、Bharat Biotech、および Sinovac による)。mRNA ワクチンには、免疫原の設計と製造が柔軟かつ効率的であるという利点があり、現在、多数のワクチン候補が開発および適用のさまざまな段階にあります。具体的には、ファイザーと BioNTech によって開発された COVID-19 mRNAワクチンBNT162b2は、成功した臨床試験で評価されています [ 2、3、4] 世界中のさまざまな地域で全国的な COVID-19 ワクチン接種キャンペーンで実施されています[ 5、6、7、8 ]。
BNT162b2 は、脂質ナノ粒子 (LNP) でカプセル化されたヌクレオシド修飾 RNA ワクチン (modRNA) であり、SARS-CoV-2 スパイク (S) タンパク質の全長をコードし、抗原的に最適な融合前立体構造を確保するために 2 つのプロリン変異によって修飾されています、無傷のウイルスを模倣して、ウイルス中和抗体を誘発します [ 3 ]。無作為化臨床試験と一致して、BNT162b2 は、現実世界の設定で COVID-19 関連の幅広い結果において高い効率を示しました [ 5]。それにもかかわらず、ワクチンの長期的な安全性と有効性の監視など、多くの課題が残っています。これは、さらなる評価と調査を保証します。BNT162b2 の安全性プロファイルは、現在、短期の臨床研究からのみ入手できます。心膜炎、不整脈、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、頭蓋内出血、血小板減少症など、BNT162b2 のあまり一般的ではない副作用が報告されています[ 4、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20]。他のタイプのワクチンで観察された副作用を報告する研究もあります [ 21 , 22 , 23 , 24 ]。ワクチン関連の副作用の根底にあるメカニズムをよりよく理解するには、臨床調査と細胞および分子分析が必要です。
最近の研究では、SARS-CoV-2 RNA が逆転写され、ヒト細胞のゲノムに組み込まれることが示されました [ 25 ]。これは、部分的な SARS-CoV-2 RNA をコードする BNT162b2 でも発生する可能性があるかどうかという問題を引き起こします。ファイザーが欧州医薬品庁 (EMA) に提供した薬物動態データでは、BNT162b2 の体内分布が、放射性標識 LNP とルシフェラーゼ modRNA を筋肉内注射することによってマウスとラットで研究されました。放射能は最初の時点 (0.25 時間) からほとんどの組織で検出され、その結果、注射部位と肝臓が主要な分布部位であり、投与後 8 ～ 48 時間で最大濃度が観察されたことが示されました [ 26]。さらに、BNT162b2 注射を受けた動物では、肝臓の肥大、空胞化、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ (γGT) レベルの上昇、アスパラギン酸トランスアミナーゼ (AST) およびアルカリホスファターゼ (ALP) レベルの上昇など、可逆的な肝臓への影響が観察された [26 ]。LNP送達システムによって誘発される一過性の肝臓への影響が以前に報告されている [ 27、28、29、30 ] にもかかわらず、 modRNAのみを含まない空の LNP だけでは重大な肝障害を引き起こさないことも示されている [27 ] 。]。したがって、この研究では、 in vitro でヒト肝細胞株に対するBNT162b2の効果を調べ、BNT162b2が内因性メカニズムを介してDNAに逆転写できるかどうかを調査することを目的としています。
2。材料と方法
2.1. 細胞培養
Huh7 細胞 (JCRB セルバンク、大阪、日本) を、 10% ( v / v ) ウシ胎児血清 (Sigma-Aldrich、F7524 ) を添加した DMEM 培地 (HyClone、HYCLSH30243.01) を用いて、 37 °C、5% CO 2で培養しました。 -500ML、米国マサチューセッツ州バーリントン) および 1% ( v / v ) ペニシリン-ストレプトマイシン (HyClone、SV30010、米国ユタ州ローガン)。BNT162b2 処理では、Huh7 細胞を 24 ウェル プレートに 200,000 細胞/ウェルの密度で播種しました。BNT162b2 mRNA ワクチン (Pfizer BioNTech, New York, NY, USA) を無菌の 0.9% 塩化ナトリウム注射液 (USP) で最終濃度 100 μg/mL に希釈し、製造元のガイドライン [ 31]。次いで、ＢＮＴ１６２ｂ２懸濁液を細胞培養培地に添加して、最終濃度０．５、１．０、または２．０μｇ／ｍＬに到達させた。Huh7 細胞を BNT162b2 の有無にかかわらず、6、24、および 48 時間インキュベートしました。細胞をPBSで完全に洗浄し、トリプシン処理によって回収し、さらに使用するまで-80°Cで保存しました。
2.2. リアルタイム RT-QPCR
製造元のプロトコルに従って、RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen、74134、ヒルデン、ドイツ) を使用して、細胞から RNA を抽出しました。RT-PCRは、RevertAid First Strand cDNA合成キット（Thermo Fisher Scientific、K1622、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国）を使用して、製造元のプロトコルに従って実行されました。Maxima SYBR Green / ROX qPCR Master Mix（Thermo Fisher Scientific、K0222、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国）を使用して、BNT162b2、 LINE-1、およびハウスキーピング遺伝子ACTBおよびGAPDHのプライマーを使用して、リアルタイム qPCR を実行しました（ 表1 ）。
2.3. 免疫蛍光染色と共焦点イメージング
Huh7 細胞を、BNT162b2 (0.5、1 または 2 μg/mL) の有無にかかわらず、40,000 細胞/ウェルの密度で 8 チャンバー スライド (LAB-TEK、154534、カリフォルニア州サンタクルーズ) で 6 時間培養しました。一次抗体抗LINE-1 ORF1pマウスモノクローナル抗体（Merck、3574308、Kenilworth、NJ、USA）、二次抗体Cy3 Donkey抗マウス（Jackson ImmunoResearch、West Grove、PA、USA）、およびHoechst（Lifeテクノロジー、34850、カールスバッド、カリフォルニア州、米国)、Thermo Fisher (ウォルサム、マサチューセッツ州、米国) のプロトコルに従います。Zeiss LSM 800 と 63X 油浸対物レンズを使用して条件ごとに 2 つの画像を撮影し、ImageJ 1.53c によって画像ごとに 15 細胞の個々の全細胞領域と核領域の染色強度を定量化しました。サイトゾルのLINE-1染色強度は、細胞全体の強度から核の強度を差し引くことによって計算されました。細胞のすべての画像には、偏りを防ぐために乱数が割り当てられました。核 (Hoechst 染色によって決定) と全細胞 (LINE-1 蛍光の境界によって決定) をマークするために、フリーハンド選択ツールを使用しました。次に、これらの領域を測定し、平均強度を使用してグループを比較しました。
2.4. ゲノムDNA精製、PCR増幅、アガロースゲル精製、サンガーシーケンシング
ゲノム DNA は、PBND バッファー (10 mM Tris-HCl pH 8.3、50 mM KCl、2.5 mM MgCl2、0.45% NP-40、0.45% Tween-20) を使用して、以前に記載されたプロトコルに従って細胞ペレットから抽出しました [32 ]。DNA 調製物から残留 RNA を除去するために、RNase (100 µg/mL、Qiagen、ヒルデン、ドイツ) を DNA 調製物に加え、37 °C で 3 時間、続いて 95 °C で 5 分間インキュベートしました。次いで、ＢＮＴ１６２ｂ２を標的とするプライマー（配列を表１に示す）を用いて、以下のプログラムでＰＣＲを実施した：９５℃で５分間、９５℃で３０秒間、５８℃で３０秒間、および７２℃で３５サイクル1分間; 最後に、72 °C で 5 分間、12 °C で 5 分間。PCR 産物は 1.4% ( w / v) アガロースゲル。予想されるサイズ（444 bps）のアンプリコンに対応するバンドを切り取り、製造元の指示に従って、QIAquick PCR Purification Kit（Qiagen、28104、ヒルデン、ドイツ）を使用してDNAを抽出しました。DNAアンプリコンの配列は、サンガー配列決定（Eurofins Genomics、Ebersberg、Germany）によって検証されました。
統計
スチューデントの両側ｔ検定およびＡＮＯＶＡを用いて統計的比較を行った。データは、平均 ± SEM または ± SD として表されます。p < 0.05の差は有意と見なされます。
2.5。倫理声明
Huh7 細胞株は、日本の研究生物資源コレクション (JCRB) セルバンクから入手しました。
3. 結果
3.1. BNT162b2 は高効率でヒト肝細胞株 Huh7 細胞に入ります
BNT162b2 がヒト肝細胞に侵入するかどうかを判断するために、ヒト肝細胞株 Huh7 を BNT162b2 に曝露しました。Huh7 細胞における LNP 送達の取り込み動態に関する以前の研究では、LNP の最大の生物学的効果は 4 ～ 7 時間の間に観察されました [ 33 ]。したがって、私たちの研究では、Huh7 細胞は BNT162b2 の濃度を増加させて (0.5、1.0、および 2.0 μg/mL)、6、24、および 48 時間培養しました。RNA を細胞から抽出し、図 1に示すように、BNT162b2 配列をターゲットとするプライマーを使用して、リアルタイムの定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応 (RT-qPCR) を実行しました。BNT162b2 の全配列は公開されている [ 34] であり、2 ヌクレオチドのキャップが含まれています。ヒトα-グロビン遺伝子の5'-UTRを組み込んだ5'-非翻訳領域（UTR）。2 つのプロリン変異を持つ SARS-CoV-2 S タンパク質の全長。ヒトミトコンドリア12S rRNA（mtRNR1）セグメントと2つのC→U変異を持つヒトAES / TLE5遺伝子セグメントを組み込んだ3'-UTR。ポリ（A）テール。BNT162b2のSタンパク質配列の詳細な分析により、ヒトゲノム配列と100％同一の124の配列と、19〜26 ntで1つのヌクレオチド（nt）ミスマッチのみを含む3つの配列が明らかになりました（表S1、補足資料を参照））。BNT162b2 RNAレベルを検出するために、SARS-CoV-2 Sタンパク質領域に位置するフォワードプライマーと3'-UTRにリバースプライマーを持つプライマーを設計しました。これにより、プライマーがヒトゲノム領域に非特異的に結合することなく、BNT162b2に固有のPCRアンプリコンを検出できます。 .
RT-qPCRの結果は、BNT162b2で処理したHuh7細胞が、6、24、および48時間でハウスキーピング遺伝子と比較して高レベルのBNT162b2 mRNAを有することを示しました（図2、非常に高いレベルのため、log 2 -ΔΔCTで表示）。3 つの BNT162b2 濃度は、1.0 と 2.0 μg/mL の間の有意差が 48 時間で観察されたことを除いて、異なる時点で同様の細胞内 BNT162b2 mRNA レベルをもたらしました。BNT162b2 mRNA レベルは、6 時間と比較して 24 時間で大幅に減少しましたが、48 時間で再び増加しました。
3.2. ヒト内因性逆転写酵素の長い散在核要素-1（LINE-1）に対するBNT162b2の効果
ここでは、 LINE-1遺伝子発現 に対する BNT162b2 の効果を調べました。RT-qPCR は、LINE-1をターゲットとするプライマーを使用して、BNT162b2 (0、0.5、1.0、および 2.0 μg/mL) で 6、24、および 48 時間処理された Huh7 細胞から精製された RNA に対して実行されました。2.0 μg/mL BNT162b2 では、コントロールと比較してLINE-1発現の大幅な増加が6 時間で観察されましたが、BNT162b2 濃度が低いほど、すべての時点でLINE-1発現が減少しました (図 3 )。
次に、LINE-1タンパク質レベルに対するBNT162b2の効果を調べました。全長 LINE-1 は、5' 非翻訳領域 (UTR)、2 つのオープンリーディングフレーム (ORF)、ORF1 および ORF2、および 3'UTR で構成され、ORF1 はシャペロン活性を持つ RNA 結合タンパク質です。LINE-1 のレトロトランスポジション活性は、核への ORF1 トランスロケーションに関与することが実証されています [ 35 ]。BNT162b2 (0.5、1.0、および 2.0 μg/mL) の有無にかかわらず 6 時間処理した Huh7 細胞を固定し、LINE-1 ORF1p に結合する抗体、および細胞核を可視化するための DNA 特異的プローブ Hoechst で染色しました (図 4 a )。免疫蛍光染色強度の定量化により、BNT162b2 は、試験したすべての濃度で全細胞領域と核の両方で LINE-1 ORF1p タンパク質レベルを増加させることが示されました (図 4 b–d)。
3.3. Huh7 細胞における逆転写 BNT162b2 DNA の検出
以前の研究では、LINE-1 タンパク質の核への侵入が逆転位と関連していることが示されている [ 35 ]。上記の免疫蛍光染色実験では、BNT162b2 の最低濃度 (0.5 μg/mL) で既に核内の LINE-1 レベルの増加が観察されました。LINE-1 が上昇したときに BNT162b2 が DNA に逆転写されるかどうかを調べるために、0.5 μg/mL の BNT162b2 で 6、24、および 48 時間処理した Huh7 細胞からゲノム DNA を精製しました。図１に示すように、精製したＤＮＡをＲＮａｓｅで処理してＲＮＡを除去し、ＢＮＴ１６２ｂ２を標的とするプライマーを使用してＰＣＲを行った。次に、増幅された DNA フラグメントを電気泳動で可視化し、ゲル精製しました (図 5）。BNT162b2 DNA アンプリコンは、3 つの時点 (6、24、および 48 時間) すべてで検出されました。サンガー配列決定により、DNAアンプリコンがプライマーに隣接するBNT162b2配列と同一であることが確認されました（表2）。DNA アンプリコンが BNT162b2 RNA ではなく DNA に由来することを確認するために、RNase 処理の有無にかかわらず、0.5 μg/mL BNT162b2 で 6 時間処理した Huh7 細胞から精製した RNA に対して PCR を実行しました (図 5 の Ctrl 5 および 6 )。 、PCR に供した RNA サンプルではアンプリコンは検出されませんでした。
4。討議
この研究では、COVID-19 mRNA ワクチン BNT162b2 が in vitro でヒト肝細胞株 Huh7 に侵入できるという証拠を提示します。BNT162b2 mRNA は、BNT162b2 曝露後 6 時間という速さで細胞内で DNA に逆転写されます。逆転写の可能なメカニズムは、内因性逆転写酵素 LINE-1 によるものであり、LINE-1 の核タンパク質分布は BNT162b2 によって上昇します。
肝細胞における LNP の細胞内蓄積は、in vivo で実証されている [ 36 ]。BNT162b2 に関する前臨床研究では、BNT162b2 がヒト細胞株 HEK293T 細胞に入り、BNT162b2 抗原の強力な発現をもたらすことが示されました [ 37 ]。したがって、この研究では、最初にヒト肝細胞株Huh7細胞へのBNT162b2の侵入を調査しました。この研究で使用された BNT162b2 濃度の選択は、説明を保証します。BNT162b2 は 3 週間間隔で 2 回連続して投与され、各用量には 0.3 mL の容量に 30 μg の BNT162b2 が含まれており、注射部位の局所濃度は最高で 100 μg/mL になります [31] 。]。同様の LNP 送達システムを使用した H10N8 および H7N9 インフルエンザ ウイルスに対する mRNA ワクチンに関する以前の研究では、mRNA ワクチンが肝臓、脾臓、心臓、腎臓、肺、脳などのいくつかの臓器にかなり非特異的に分布し、肝臓は、筋肉内注射部位の約 100 倍低い [ 38 ]。ファイザーによって EMA に提供された BNT162b2 に関する評価レポートでは、ラットの薬物動態分布研究により、総用量の比較的大きな割合 (最大 18%) が肝臓に分布することが示されました [ 26]。したがって、肝細胞の実験では、0.5、1、および 2 μg/mL のワクチンを使用することを選択しました。ただし、BNT162b2 のより広い範囲の低濃度および高濃度の効果も、将来の研究で検証する必要があります。
現在の研究では、in vitro 調査のためにヒト肝細胞株を採用しました。肝細胞がワクチン由来のSARS-CoV-2スパイクタンパク質も提示するかどうかは調査する価値があります。これにより、肝細胞が以前にプライミングされたスパイクタンパク質反応性細胞傷害性T細胞の標的になる可能性があります. BNT162b2 ワクチン接種後に自己免疫性肝炎 [ 39 ]を発症した個人の症例報告があります。肝機能に対するBNT162b2の潜在的な影響をよりよく理解するために、将来の研究にはin vivoモデルが望まれます。
BNT162b2 の毒性報告では、遺伝毒性や発がん性の研究は提供されていません [ 26 ]。私たちの研究は、BNT162b2が肝細胞株Huh7のDNAに逆転写される可能性があることを示しており、これは、BNT162b2由来のDNAが宿主ゲノムに組み込まれ、ゲノムDNAの完全性に影響を与え、遺伝毒性を潜在的に媒介する可能性があるかどうかという懸念を引き起こす可能性があります副作用。この段階では、BNT162b2 から逆転写された DNA が細胞ゲノムに組み込まれているかどうかはわかりません。BNT162b2にさらされた細胞の全ゲノム配列決定や、BNT162b2ワクチン接種を受けたヒト被験者の組織など、BNT162b2がゲノムの完全性に及ぼす影響を実証するには、さらなる研究が必要です。
ヒト自律型レトロトランスポゾン LINE-1 は、細胞内因性逆転写酵素であり、ヒトに残っている唯一のアクティブなトランスポゾンであり、それ 自体および他の非自律的要素をレトロトランスポーズすることができ [40、41]、ヒトゲノムの約 17% が LINE-1 配列で構成されています。 [ 42 ]。非自律型Alu要素、短い散在型ヌクレオチド要素 (SINE)、可変数タンデムリピート (VNTR)、および細胞の mRNA で処理された偽遺伝子は、トランスで働く LINE-1 レトロトランスポジションタンパク質によってレトロトランスポーズされる[ 43、44]。最近の研究では、内因性 LINE-1 が、感染したヒト細胞のゲノムにおける SARS-CoV-2 配列の逆転写と統合を媒介することが示されました [25 ]。さらに、内因性 LINE-1 の発現は、SARS-CoV-2 感染を含むウイルス感染時にしばしば増加します[ 45、46、47 ]。以前の研究は、LINE-1 レトロトランスポジション活性が RNA 代謝 [ 48 , 49 ]、DNA 損傷応答 [ 50 ]、およびオートファジー [ 51 ] によって調節されることを示しました。LINE-1 の効率的なレトロトランスポジションは、多くの場合、有糸分裂中の細胞周期および核膜の崩壊と関連している [ 52、53]、およびLINE-1の核への侵入を促進する外因性レトロウイルス[ 54、55 ] 。私たちの研究では、テストしたすべての濃度（0.5、1、および2μg/ mL）でBNT162b2による核内の免疫組織化学によって決定されるLINE-1 ORF1p分布の増加が観察されましたが、LINE-1は上昇しました遺伝子発現は、BNT162b2 の最高濃度 (2 μg/mL) で検出されました。遺伝子転写は、クロマチン修飾、転写因子調節、および RNA 分解速度によって調節されることは注目に値しますが、タンパク質の翻訳調節には、開始コドンでのリボソーム動員、ペプチド伸長の調節、タンパク質合成の終結、またはリボソーム生合成が含まれます。 . これらの 2 つのプロセスは、異なるメカニズムによって制御されているため、外部の課題に対応して常に同じ変化パターンを示すとは限りません。BNT162b2 に応答した LINE-1 活動の正確な調節は、さらなる研究に値します。
この研究で使用した細胞モデルは癌細胞株であり、分裂していない体細胞とは異なるアクティブな DNA 複製があります。また、Huh7 細胞は、RNA 代謝に関与するアップレギュレートされたタンパク質を含む、有意に異なる遺伝子およびタンパク質の発現を示すことも示されています [ 56 ]。ただし、細胞増殖は、骨髄や上皮の基底層などのいくつかのヒト組織でも胚形成中に活発であるため、そのような条件下でのゲノムの完全性に対するBNT162b2の影響を調べる必要があります。さらに、LINE-1 の効果的な逆転移は、ヒトニューロンなどの非分裂細胞および最終分化細胞でも報告されています [ 57 , 58 ]。
ファイザーの EMA 評価レポートでは、BNT162b2 が脾臓 (<1.1%)、副腎 (<0.1%)、および卵巣と精巣 (<0.1%) の低い測定可能な放射能に分布することも示されました [26 ]。さらに、BNT162b2 の胎盤移行に関するデータは、ファイザーの EMA 評価レポートから入手できません。私たちの結果は、BNT162b2 mRNA が局所注射部位濃度の 0.5% に相当する濃度 (0.5 μg/mL) で Huh7 細胞に容易に入り、LINE-1 遺伝子およびタンパク質発現の変化を誘発し、6 時間以内に BNT162b2 の逆転写を引き起こすことを示しました。検出できます。したがって、in vitro および in vivo の両方で、他の細胞型および組織に対する BNT162b2 の効果をさらに調査することが重要です。
5。結論
私たちの研究は、ヒト肝細胞株に対する COVID-19 mRNA ワクチン BNT162b2 の効果に関する最初の in vitro 研究です。BNT162b2 の細胞への高速侵入と、それに続く BNT162b2 mRNA の DNA への細胞内逆転写に関する証拠を提示します。
補足資料
次のサポート情報は、https: //www.mdpi.com/article/10.3390/cimb44030073/s1 からダウンロードできます。
著者の貢献
MA、FOF、DY、MB、CL は in vitro 実験を行いました。MA と FOF は、データ分析を実行しました。MR と YDM は、研究の実施に貢献し、研究を設計し、監督しました。YDM は、すべての著者からの情報をもとに論文を書きました。すべての著者は、原稿の公開版を読み、同意しました。
資金調達
この研究は、スウェーデン研究評議会、戦略的研究エリア Exodiab、Dnr 2009-1039、スウェーデン政府臨床研究基金 (ALF)、およびスコーネ大学病院の財団によって支援されました。
治験審査委員会の声明
適用できない。
インフォームド コンセント ステートメント
適用できない。
データの可用性に関する声明
この調査結果を裏付けるすべてのデータは、記事およびサポート情報内で入手できます。
謝辞
著者は、Sven Haidl、Maria Josephson、Enming Zhang、Jia-Yi Li、Caroline Haikal、および Pradeep Bompada のこの研究への支援に感謝します。
利益相反
著者は利益相反を宣言していません。
参考文献
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